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2017年臨床檢驗技師臨床免疫學知識：酶
導語：酶指具有生物催化功能的高分子物質， 在酶的催化反應體系中，反應物分子被稱為底物，底物通過酶的催化轉化為另一種分子。常見的酶有哪些?一起來看看吧。
1常用的酶：
1.辣根過氧化物酶(HRP)，應用最廣泛，強酸是其強烈抑制劑，采用硫酸作為反應終止劑。避免使用疊氮鈉作為酶標復合物的防腐劑。
2.堿性磷酸酶(ALP)，含磷酸鹽的緩沖液對酶具有抑制作用，不能用磷酸鹽緩沖液PBS
3.β-半乳糖苷酶(β-Gal)
常用的底物：
1.HRP有鄰苯二胺(OPD)，最敏感，顯橙黃色，硫酸終止后呈棕黃色、四甲基聯苯胺(TMB)，最常用，作用后顯藍色，終止后變為黃色。
2.ALP有對-硝基苯磷酸酯(p-NPP)，用NaO H 作為反應終止劑。
3.β-Gal有
4-甲基傘形酮-β-D半乳糖苷(4MUG)。
常用的標記方法：交聯法(戊二醛~)和直接法(改良過碘酸鈉法)
固相載體的選擇：塑料制品(聚苯乙烯、聚氯乙烯)、微粒、膜載體
2.酶聯免疫吸附試驗(ELISA)
原理：把抗原或抗體結合到某種固相載體表面并保持其免疫活性，即形成固相抗原或抗體;將抗原或抗體與酶連接成酶標記抗原或抗體，它既保留了免疫活性，又保留了酶的活性;在測定時，把受檢標本(含待測抗體或抗原)和酶標抗原或抗體按一定程序與結合在固相載體表面的抗原或抗體起反應形成固相化抗原抗體-酶復合物，用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體-酶復合物與其它成分分離，結合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質的量成一定的比例，加入酶反應的底物后，底物被固相載體上的酶催化生為有色產物，通過定性或定量檢測有色產物的量即可確定樣品中待測物質的含量。
方法類型：ELISA檢測抗原的方法主要有：
①雙抗體夾心法：適用于至少兩個抗原決定簇(AD)的Ag。
先將特異性抗體與固相載體結合，形成固相抗體，加入待測標本并溫育，使標本中的抗原與固相抗體充分反應，形成固相抗體抗原復合物，洗滌去除其他游離成分;然后加入酶標記抗體并溫育，使固相抗體抗原復合物與酶標記抗體結合，形成 固相抗體-待測抗原-酶標記抗體 復合物，為“雙抗體夾心”;洗滌去除游離酶標記抗體。加入底物，固相載體結合的酶可催化底物成為有色產物，根據產物的顯色程度進行抗原的定性或定量檢測。
臨床上常用于乙肝表面抗原HBsAg、甲胎蛋白AFP、人絨毛膜促性腺激素HCG等項目的檢測。
②雙位點一步法：該法是針對抗原分子上兩個不同且空間距離較遠的抗原決定簇，
分別制備兩種單克隆抗體，在包被時使用一種單抗，酶標記時使用另一種單抗。測定時將含待測抗原標本和酶標記抗體同時加入反應體系，兩種抗體分別與不同的抗原決定簇結合，只進行一次溫育，在洗滌后即可加底物進行顯色反應。擔當待測抗原濃度過高時，可出現鉤狀效應，甚至出現假陰性結果，必要時可將標本適當稀釋后重新測定。)
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