水環境糞大腸菌群監測2種分析方法的對比論文
糞大腸菌群是監測水體是否被糞便污染的指示菌，是監測地表水尤其是飲用地表水的重要指標之一。它是總大腸菌群的一部分，其基本性狀和總大腸菌群相似。在實驗時，將培養溫度提高到44.5°C，我們把可以在此條件下生長并發酵產酸產氣的，稱糞大腸菌群。
經典的糞大腸菌群的監測方法是采用多管發酵法，但這種方法具有前期準備時間長、任務繁重;培養過程中操作繁瑣的缺點，并且事后還要清洗大量的試管，浪費人力、物力、財力。為此很多廠家研發了大腸菌群的快檢紙片。采用紙片法，大大縮短了實驗的時間，并且根本不需要再清理大量的試管，減輕了勞動強度，也節約了寶貴的水資源。那么，多管發酵法和紙片法的數據究竟有沒有相關性?作者采用某廠生產的大腸菌群的快檢紙片通過對比實驗旨在探討這個問題。
一、分析方法
1、多管發酵法
(1)培養基
單倍和三倍乳糖蛋白胨培養液(培養液的成分與制備略，下同)
EC培養液
(2)步驟
①水樣接種量：將水樣充分混勻后，根據水樣污染的程度確定水樣的接種量，每個樣品至少用3個不同的水樣量接種，同一接種水樣量要有五管。
如果接種的體積為10ml，則接種于含有三倍濃度5ml的乳糖蛋白胨培養液的試管內，如果接種量為1ml或者小于1ml，則接種于含有單倍濃度10ml的乳糖蛋白胨培養液的試管內。
②初發酵：
將接種了水樣的試管，在37±0.5°C下培養24±2h，產酸和產氣的發酵管表明實驗陽性。如產氣不明顯，可輕拍試管，有小氣泡升起的為陽性。
③復發酵試驗
輕微振蕩初發酵陽性的發酵管，用3mm接種環將培養物轉接到EC培養液中。在44±0.5°C水浴中培養24±2h，培養后立即觀察。發酵管產酸產氣表明確信試驗陽性。
④計算和報告結果
根據不同接種量的發酵管所出現的陽性結果的數目，從MPN表中查相應的MPN指數，計算出每升水中糞大腸菌群的MPN值。
2、紙片法
采用某廠生產的大腸菌群快檢紙片
①水樣接種量：將水樣充分混勻后，根據水樣污染的程度確定水樣的稀釋倍數，每個樣品至少用3個不同的水樣量接種，同一接種水樣量要有五個紙片。
如果接種的體積為10ml，則接種于大紙片內。如果接種量為1ml或者小于1ml，則接種小紙片內。
②發酵試驗
樣品接種后在44±0.5°C的恒溫培養箱中培養10-16小時后，觀察結果。
③計算和報告結果
紙片說出現紅點，其周圍呈黃色者為陽性。根據不同接種量的紙片所出現的陽性結果的數目，從MPN表中查相應的MPN指數，計算出每升水中糞大腸菌群的MPN值。
二、t檢驗的結果
根據成對樣本的假設檢驗，對這2組數據進行成對數據平均數的比較，看它們有無顯著性差異。
(公式略)
計算結果：t=0.648,查“t值表”，df=14-1=13,t0.01,13=3.012,現實得t0.01。
推斷：認為2種試驗方法沒有顯著性差異。
三、結論
紙片法和多管發酵法監測的結果沒有顯著性差異，用紙片法取代多管發酵法完全可行。
(一)與傳統的多管發酵法相比，紙片法具有如下優點：
1、時間短——10-16小時出檢測結果，大大縮短了監測時間;
2、降低了監測人員的工作強度——省去了煩瑣的前期培養基的配制、分裝、滅菌，后期洗刷試管，中期重新接種、培養等工作;
3、結果易于判斷——根據顏色識別，不用費力觀察氣泡，檢測結果判定簡單直觀;
(二)在使用紙片法時，筆者認為需要注意以下幾點：
1、對取樣量為1ml的紙片，移液管要在紙片的中央放液，使樣品均勻的向四周擴散。
2、取樣量為10ml的紙片，因為水樣不能完全被紙片吸收，要盡量避免接種后和培養時水樣流出，造成誤差。
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